1．首(shou)先將內層滅菌桶取(qu)出，再向外層鍋內加入適量的水(shui)，使水(shui)面與三角(jiao)擱架相平為宜。

　　2．放回滅菌桶，并裝(zhuang)入(ru)待滅菌物品(pin)。注意不(bu)(bu)要(yao)(yao)裝(zhuang)得太擠，以(yi)免(mian)妨礙蒸(zheng)汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶(ping)與(yu)試管(guan)口端(duan)均不(bu)(bu)要(yao)(yao)與(yu)桶壁接觸(chu)，以(yi)免(mian)冷(leng)凝水(shui)淋(lin)濕包口的紙而透入(ru)棉(mian)塞。

　　3．加蓋，并將(jiang)蓋上的排(pai)氣(qi)軟管插入內層滅菌(jun)桶(tong)的排(pai)氣(qi)槽內。再(zai)以兩(liang)兩(liang)對(dui)(dui)稱的方式同時旋緊相對(dui)(dui)的兩(liang)個(ge)螺(luo)(luo)栓，使(shi)螺(luo)(luo)栓松緊一致，勿(wu)使(shi)漏氣(qi)。

　　4．用(yong)電爐或煤氣加(jia)(jia)熱，并同(tong)時(shi)打(da)開(kai)排(pai)(pai)氣閥(fa)，使水(shui)沸騰(teng)以排(pai)(pai)除(chu)鍋內(nei)的冷空氣。待冷空氣*排(pai)(pai)盡后，關上排(pai)(pai)氣閥(fa)，讓鍋內(nei)的溫度隨蒸(zheng)汽壓(ya)力增加(jia)(jia)而逐漸上升。當(dang)鍋內(nei)壓(ya)力升到(dao)所需壓(ya)力時(shi)，控制熱源，維持壓(ya)力至所需時(shi)間(jian)。本實驗用(yong) 1．05kg/cm2，121．3℃，20分鐘滅菌(jun)。

　　5．滅(mie)菌所需時間(jian)到(dao)后(hou)，切斷電源或關閉煤氣，讓滅(mie)菌鍋內(nei)溫度自然(ran)下(xia)降(jiang)(jiang)，當壓(ya)(ya)力(li)表的壓(ya)(ya)力(li)降(jiang)(jiang)至0時，打開(kai)(kai)排氣閥，旋(xuan)松螺栓，打開(kai)(kai)蓋子，取出(chu)滅(mie)菌物品。如果壓(ya)(ya)力(li)未降(jiang)(jiang)到(dao)0時，打開(kai)(kai)排氣閥，就(jiu)會(hui)因鍋內(nei)壓(ya)(ya)力(li)突然(ran)下(xia)降(jiang)(jiang)，使容器內(nei)的培養基由于內(nei)外壓(ya)(ya)力(li)不平衡而(er)沖出(chu)燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而(er)發生污(wu)染。

　　6．將取出(chu)的滅菌培養(yang)(yang)基放入 37℃溫(wen)箱培養(yang)(yang)24小(xiao)時，經檢(jian)查(cha)若無(wu)雜(za)菌生(sheng)長，即可待用。